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Preparar el medio de cultivo
Preparar el medio de cultivo
- Para preparar el PDYA empieza cortando las patatas en daditos y pongalos en el agua a hervir sin sal.
Despues de hervidas puede prepararse un pure de patatas. Y comerlo.
Lo que utilizará para preparar el medio de cultivo será el liquido resultante. - Ahora para preparar tanto el MYA como el PDYA mezcle todos los ingredientes (excepto el agua oxigenada) en
un recipiente junto con la cantidad deseada de agua (en el caso del MYA) o junto con el extracto de
patatas (en el caso del PDYA). El recipiente debe tener dos veces el
volumen que realmente usará, para evitar que el agar hirviente se derrame al cocinar.
- Luego ponga el recipiente (los recipientes) en una olla a presión para fundir y
esterilizar el medio. Como recipientes utilizo dos botellas pequeñas de salsa de soja,
pero puede ser cualquier tipo de frasco o tarro de vidrio termo resistente.
Y lo más importante: como que se trata de esterilizar, los recipientes tienen que ir tapados.
Las tapas se colocan flojamentente en su lugar (a falta de tapas puede utilizar también papel de aluminio) y el medio de cultivo se cocina a presión
por no más de 10 minutos, permitiendo diez minutos iniciales de producción de vapor para
fundir el agar. Importante: No cocine el agar mas de 20 minutos. Cualquier tiempo mayor
producirá productos de caramelización, que son toxicos para el micelio). Si tiene
placas de Petri de vidrio las puede esterilizar
en el mismo tiempo.
Personalmente utilizo placas de Petri de plástico de "uso único" que esterilizo en el microondas y de esta manera las utilizo varias veces.
Las puede comprar en farmacias, aunque opté comprarlas en e-bay (busque por "petri dish"). 300ml de medio alcanza para unas 10 - 12 placas de Petri de 9cm en diámetro. - Una vez acabada la cocción, apague el fuego y deje que baje la presión. De aquí en adelante tendrá que trabajar en unas condiciones de máxima higiene.
Retire cuidadosamente el recipiente que contiene el medio y deje que se enfríe. Necesitará
un termómetro de cocina para medir la temperatura del agar.
Desinfecte antes la punta del termómetro con alcohol.
Si el agar se ha enfriado demasiado lo puede recalentar en baño María y después en el microondas.
El agar se solidifica a los 40°C pero a unos 60°C empezará a coger cuerpo. A una temperatura de más de 70°C el agua oxigenada disociará en agua y oxigeno antes de esterilizar el medio de cultura. Cuando el termómetro marque unos 65°C añada el agua oxigenada. Para esto puede utilizar una jeringuilla de plástico de 5ml. Vuelva a colocar la tapa y mezcle el peróxido en el medio moviendo el frasco con un movimiento circular, invirtiendo las direcciones un par de veces (pero teniendo gran cuidado en evitar hacer muchas burbujas). - A continuación llene las placas de Petri. Para saber como hacerlo mire el youtube siguiente:
